🧬 Flow Cytometry를 통한 Immune Cell Phenotyping

 Flow Cytometry(FACS)는 면역세포 분석(Immune Cell Phenotyping)에 필수적인 도구로, 단일 세포 수준에서 세포 아형(subset)과 기능적 특성을 구분할 수 있습니다.
특정 표면 마커 및 세포내 마커에 대한 항체를 활용하면,

  • T세포: CD3, CD4, CD8, CD25
  • B세포: CD19, CD20
  • NK세포: CD16, CD56
  • Myeloid 세포: CD11b, CD14, CD68, CD206

를 정밀하게 확인할 수 있습니다.

 

🔍 Bio-techne (R&D systems, Novus biologicals) FACS Antibody의 장점

  • BD, BioLegend, Invitrogen 등 타사에서 흔히 제공하지 않는 Unique target 보유
  • 다양한 Host 및 종 특이성(reactivity) 지원 (human, mouse, rat)
  • Flow Cytometry에 최적화된 높은 민감도와 재현성
  • 패널 디자인 및 실험 최적화를 위한 전문 기술 지원

 

📊 Immune Cell Phenotyping 응용 분야

  • T세포 아형 분석 (naïve, memory, regulatory T cell)
  • NK세포 활성화 프로파일링
  • 종양 미세환경 분석 (Tumor Microenvironment)
  • 줄기세포 및 면역세포 치료 연구
  • 염증성 질환 기전 규명

 

🧾 추천 FACS Antibody Panel

  • T세포 패널: CD3, CD4, CD8, CD25, FOXP3
  • B세포 패널: CD19, CD20, CD27
  • NK세포 패널: CD16, CD56, NKG2D
  • Myeloid 패널: CD11b, CD14, CD68, CD206

 

세포 유형 주요 마커 조합
T cells CD3⁺ / CD4⁺ 또는 CD8⁺
CD4⁺ T helper cells CD3⁺ CD4⁺ CD8⁻
CD8⁺ Cytotoxic T cells CD3⁺ CD4⁻ CD8⁺
Regulatory T cells (Tregs) CD3⁺ CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺
Naive T cells CD45RA⁺ CCR7⁺
Central Memory T cells CD45RO⁺ CCR7⁺
Effector Memory T cells CD45RO⁺ CCR7⁻
NK cells CD3⁻ CD56⁺ (± CD16)
NKT cells CD3⁺ CD56⁺
B cells CD19⁺ / CD20⁺
Plasma cells CD19⁻ CD138⁺
Monocytes CD14⁺ / CD16⁺
Macrophages CD14⁺ CD68⁺ (variable CD11b⁺, CD80/CD86⁺)
Dendritic cells HLA-DR⁺ / CD11c⁺ / CD123⁺ (subset에 따라 상이)
Granulocytes (Neutrophils) CD15⁺ / CD16⁺ / CD66b⁺

 

🎨 형광 리스트 & 스펙트럼 도구

다양한 레이저별 형광체와 Excitation/Emission 파장을 한눈에 확인할 수 있습니다.
패널 설계 시 형광체 간 스펙트럼 중첩을 피하기 위해 Novus Spectra Viewer를 활용해 보세요.

 

📌 형광 리스트 요약

  • UV (350/355nm): AF 350, DyLight 350
  • Violet (405nm): AF 405, DyLight 405, mFV 405, mFV 500, mFV 610
  • Blue (488nm): FITC, AF 488, DyLight 488, PerCP, PE, PE/Cy7, PE/atto594, PE/Cy5.5
  • Yellow-Green (561nm): AF 532, JF 549, DyLight 550, AF 549, DyLight 594
  • Red (633/640nm): APC, AF 647, JF 647, DyLight 650, DyLight 680, AF 700, AF 750, APC/Cy7


🔗 Novus Spectra Viewer 바로가기

 

🎥 1분 영상: Immune Cell Phenotyping 빠른 소개

FACS 기반 Immune Cell Phenotyping의 핵심 개념을 짧게 요약한 영상입니다.
👉 YouTube Shorts에서 보기

 

💡 패널 설계 & 실험 팁

  • Compensation: single-stain control, FMO(Florescence Minus One) 준비 필수
  • 시약 선택: 항체 클론·형광체 밝기·적정화(titration)로 신호대잡음비 최적화
  • 세포 준비: Fc block, Dead cell 염색 포함 권장
  • 분석 전략: FSC/SSC 세포 구역 선택 → 더블릿/Dead cell 제거 → Subtype/활성 마커 순으로 gating

 

❓ 자주 묻는 질문 (FAQ)

Q1. Immune Cell Phenotyping이란 무엇인가요?
특정 마커에 대한 항체를 사용하여 Flow Cytometry로 면역세포 아형과 활성 상태를 단일세포 수준에서 확인하는 연구 방법입니다.

Q2. T세포 분석 패널은 어떻게 구성하나요?
CD3로 전체 T세포를 확인한 뒤, CD4/CD8으로 세부 아형을 나누고, CD25 및 FOXP3를 추가하여 조절 T세포(Regulatory T cell)를 구분할 수 있습니다.

Q3. FACS 항체 선택 시 주의할 점은 무엇인가요?
A. FACS 실험에서는 형광체의 스펙트럼 중첩(Compensation), 항체 클론의 특이성, 시약의 타이터(Titration) 가 핵심 고려 요소입니다. 또한 사용하는 Flow Cytometer의 레이저 파장필터 세팅에 맞는 형광체를 선택해야 최적의 신호와 낮은 백그라운드를 확보할 수 있습니다.

Q4. 어떤 Host 종 항체를 선택해야 하나요?
A. 실험에 사용하는 세포주 또는 동물 모델에 따라 Host 특이성이 다른 항체를 선택해야 합니다. 예를 들어 anti-human CD3는 사람 T세포에 특이적이고, anti-mouse CD3는 마우스 연구에 적합합니다. Bio-techne (R&D systems, Novus biologicals)는 Human, Mouse, Rat 등 다양한 종에 대응하는 FACS Antibody를 제공합니다.

Q5. 여러 형광체를 동시에 사용할 때 어떻게 최적화하나요?
A. ① 스펙트럼 오버랩을 최소화하는 형광체 조합을 선택하세요. ② Novus Spectra Viewer를 활용해 레이저·필터별 파장을 확인하면 효과적입니다. ③ Single-stain control과 FMO(Florescence Minus One) 컨트롤을 포함시켜 정확한 게이팅을 보장하세요.


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